En nuestra anterior entrega se explicó cómo son obtenidas las células madre inducidas pluripotentes (IPSCs) a partir de un proceso llevado a cabo en células somáticas, denominado reprogramación. Este método conlleva a una expresión “forzada” de genes implicados en la capacidad de diferenciación celular que desglosaremos en este artículo.

Para realizar este proceso de reprogramación es necesario tiener en cuenta estos tres factores clave:

• Fuente de las células somáticas
• Factores de reprogramación
• Co-cultivo con células alimentadoras, también llamadas feeders

Los tejidos que son empleados en la reprogramación celular deben ser obtenidos siguiendo los protocolos apropiados y establecidos por cada institución, según sus necesidades. Estos protocolos incluyen la determinación de los criterios de elegibilidad del donante del tejido, el establecimiento de aspectos bioéticos, así como la firma de consentimiento informado. También es importante tener en cuenta la definición del tipo de tejido a ser extraído, así como el método de obtención. En la Fundación Banco Nacional de Sangre Hemolife, estandarizamos el protocolo partiendo de biopsias de piel, su posterior disgregación y obtención de fibroblastos.

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Existen varias formas para la realización del método de reprogramación, que incluyen la expresión de los factores de reprogramación en virus, ácidos nucleicos o pequeñas moléculas. Cada uno tiene sus ventajas y desventajas, por ello la selección de este método es un punto crítico en el establecimiento del protocolo. Los factores de reprogramación comúnmente empleados son: Oct4, Sox2, Klf4 y/o cMyc y en general el proceso de reprogramación es poco eficiente, ya que se sabe que las tasas de éxito de obtención de IPSCs oscilan entre el 0.01–0.1 %. 

En nuestro caso, empleamos un método de reprogramación que implica el uso de un virus de origen animal, que no se integra en el genoma de la célula somática a ser reprogramada, por ello tiende a ser más seguro y efectivo. Posterior a la introducción de los factores de reprogramación, las células empiezan a formar colonias semejantes morfológicamente a las células madre embrionarias. El éxito de este proceso es evaluado por el número de colonias de IPSCs obtenido, su morfología y la expresión de marcadores de pluripotencia. En l.a Fundación seleccionamos los marcadores positivos SSEA-4 y Nanog y como marcador negativo los SSEA-1.

En la práctica tradicional para la expansión de células madre embrionarias e IPSCs, se ha requerido el co-cultivo con células alimentadoras que secretan factores que favorecen  que continúen siendo células no especializadas Nuestro equipo de trabajo estableció un protocolo libre de células alimentadoras, el cual involucra el uso de vitronectina (como matriz extracelular) y un método de cultivo que implica también el mantenimiento de las células libres de suero y de otros productos derivados de animales, además de inhibir su posible especialización.

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Después de la obtención y la expansión de las IPSCs, se debe hacer un stock celular por medio de un protocolo de criopreservacióndefinido. En Hemolife llevamos a cabo un protocolo de criopresevación llevado a cabo en un equipo denominado cryoplaner, que permite la congelación gradual y continua de las células, favoreciendo su viabilidad, y permitiendo el uso de medio de congelación libre de suero de origen animal.

En conclusión, las IPSCs están revolucionando la forma en que hacemos terapia celular. Por lo mismo, nuestro equipo profesional recomienda que, antes de iniciar, se revisen las necesidades y la proyección que se quiere en cada institución, para posteriormente estandarizar cuidadosamente los pasos requeridos para su obtención con el fin de tener una mayor tasa de éxito.

Dra. Ana Luisa Muñoz – Directora Laboratorio de Investigación Hemolife.

Dr. Miguel Germán Rueda – CEO Hemolife